Partículas Lentivirales de Activación (m) β-2-Microglobulin: sc-419281-LAC

B2m codifica la β-2-microglobulina, un componente conservado de los complejos del MHC de clase I, necesario para el plegamiento adecuado, la estabilidad y la presentación en la superficie celular de antígenos peptídicos. Al apoyar las vías de procesamiento y presentación de antígenos, la β-2-microglobulina influye en la vigilancia inmunitaria, el reconocimiento por células T CD8+ y las respuestas de “falta de lo propio” (missing-self) de las células NK. La expresión alterada de B2m perturba el tráfico del MHC I y puede remodelar la señalización inflamatoria y los programas de respuesta a interferón en diversos tejidos. En modelos murinos, B2m se utiliza ampliamente para estudiar mecanismos de evasión inmunitaria, biología del trasplante, autoinmunidad e interacciones tumor–sistema inmunitario en contextos inmunocompetentes.

Las partículas de activación lentiviral β-2-Microglobulin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de B2m en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral β-2-Microglobulin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción B2m, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de β-2-Microglobulin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo B2m y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.