β-1,4-Gal-T1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403299-NIC

B4GALT1 codifica a β-1,4-Gal-T1 humana, uma glicosiltransferase residente no Golgi que transfere galactose para N-acetilglucosamina, gerando estruturas Galβ1-4GlcNAc (LacNAc) em glicanos N- e O-ligados e em glicolipídios. Essa atividade sustenta a maturação de glicanos na via secretora e molda padrões de glicosilação na superfície celular que influenciam o dobramento de proteínas, o tráfego intracelular, a sinalização de receptores e as interações célula–célula ou célula–matriz. A função da β-1,4-Gal-T1 se cruza com processos dependentes de glicosilação, como ligação a lectinas, reconhecimento imune e remodelamento da matriz extracelular. Alterações na atividade de B4GALT1 e na abundância de LacNAc têm sido associadas à desregulação da função de glicoproteínas observada em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo distúrbios congênitos da glicosilação e alterações do glicoma associadas a neoplasias.

β-1,4-Gal-T1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus B4GALT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de B4GALT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função B4GALT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com B4GALT1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.