α Enolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420178
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- α Enolase Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im α Enolase-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α Enolase: sc-101513
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α Enolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420178 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Eno1 kodiert α-Enolase, ein konserviertes Metalloenzym, das in der Glykolyse die Umwandlung von 2-Phosphoglycerat zu Phosphoenolpyruvat katalysiert und damit die ATP-Generierung sowie den Kohlenstofffluss unter unterschiedlichen Nährstoffbedingungen unterstützt. Über seine kanonische metabolische Funktion hinaus trägt ENO1 zu einer umfassenderen metabolischen Umprogrammierung bei und kann durch seinen Einfluss auf den glykolytischen Durchsatz das Redoxgleichgewicht, die Anpassung an Hypoxie und zelluläre Stressantworten mitsteuern. Veränderte ENO1-Expression und -Aktivität wurden mit proliferativen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird ENO1 häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen der Energiestoffwechsel mit onkogenen Signalwegen und der Funktion von Immunzellen zusammenwirkt. In Mausmodellen dient Eno1 als gut handhabbarer Knotenpunkt, um glykolysegekoppelte Mechanismen zu analysieren, die Zellwachstum, Migration und Reaktionen auf Signale aus dem Mikromilieu prägen.
Das α Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eno1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eno1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eno1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α Enolase-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eno1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α Enolase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Eno1-Exone abzielen, die für die α Enolase-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eno1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom α Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α Enolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eno1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α Enolase HDR-Plasmid (m) und α Enolase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eno1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eno1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.