Plásmido CRISPR de Activación (m) α Enolase: sc-420178-ACT

El gen Eno1 de ratón codifica la α-enolasa, una metaloenzima glucolítica que cataliza la interconversión de 2‑fosfoglicerato y fosfoenolpiruvato, conectando el metabolismo central del carbono con la homeostasis energética celular. Más allá de la glucólisis, la α‑enolasa puede influir en la unión a plasminógeno, las respuestas al estrés y funciones asociadas al ARN según el contexto subcelular, vinculando el estado metabólico con la dinámica del citoesqueleto y la señalización. Las alteraciones en la actividad y la expresión de ENO1 se asocian con frecuencia con la reprogramación metabólica y microambientes inflamatorios, lo que respalda su relevancia en estudios de proliferación, respuestas a la hipoxia y modulación inmunitaria en modelos de enfermedad. En sistemas murinos, Eno1 se investiga comúnmente en vías que regulan el uso de glucosa, el equilibrio redox y las respuestas adaptativas al estrés nutricional.

α Enolase El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Eno1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α Enolase El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Eno1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Eno1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α Enolase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Eno1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α Enolase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α Enolase en células tumorales con expresión de Eno1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.