α E-catenin Plasmide Double Nickase (h): sc-401151-NIC

CTNNA1 codifica per l’α E-catenina umana, un componente fondamentale delle giunzioni aderenti che collega i complessi caderina–β-catenina al citoscheletro di actina per stabilizzare l’adesione cellula‑cellula e regolare la tensione corticale. Coordinando il rimodellamento delle giunzioni con la dinamica actomiosinica, l’α E-catenina contribuisce alla polarità epiteliale, alla morfogenesi dei tessuti e al controllo del comportamento cellulare dipendente dal contatto. La funzione di CTNNA1 si intreccia con vie che governano l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione giunzionale, includendo un crosstalk con la regolazione Wnt/β-catenina a livello di membrana e negli output trascrizionali. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CTNNA1 sono state associate a difetti di adesione e a fenotipi rilevanti per l’invasione nella biologia del cancro, oltre a cambiamenti dell’integrità epiteliale pertinenti a contesti di sviluppo ed ematologici.

α E-catenin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTNNA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTNNA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTNNA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTNNA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.