Plásmido Doble Nickase (h) α4a Tubulin: sc-400016-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)α4a Tubulin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa α4a Tubulin (h) y el plásmido de doble nickasa α4a Tubulin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TUBA4A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α4a Tubulin Anticuerpo (MH-17): sc-134241
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) α4a Tubulin | sc-400016-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) α4a Tubulin | sc-400016-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA4A codifica la tubulina α4a, una isoforma central de α-tubulina que forma heterodímeros con la β-tubulina para construir microtúbulos necesarios para la organización del citoesqueleto, el transporte intracelular y la dinámica del huso mitótico. La remodelación de los microtúbulos, impulsada por la composición de isoformas de tubulina y las modificaciones postraduccionales, influye en la polaridad celular, el tráfico vesicular y el crecimiento de neuritas mediante vías que coordinan proteínas motoras y proteínas asociadas a microtúbulos. Las alteraciones en la homeostasis de la tubulina y en la dinámica de los microtúbulos se han implicado en fenotipos neurodegenerativos y defectos del transporte axonal, y en estudios genéticos se ha asociado la variación en TUBA4A con la susceptibilidad a enfermedades de la neurona motora. En consecuencia, TUBA4A se investiga con frecuencia en modelos de respuesta al estrés del citoesqueleto, morfogénesis neuronal y sensibilidad a compuestos dirigidos a microtúbulos.
α4a Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBA4A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBA4A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBA4A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBA4A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.