Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SCF Plasmide Double Nickase (h): sc-416442-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SCF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SCF Double Nickase Plasmid (h) e il SCF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KITLG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SCF Antibody (G-3): sc-13126
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SCF Plasmide Double Nickase (h) | sc-416442-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SCF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano KITLG codifica lo stem cell factor (SCF), un ligando chiave per il recettore tirosin-chinasico KIT (CD117) che regola sopravvivenza, proliferazione, migrazione e differenziamento nei progenitori ematopoietici, nei melanociti, nelle cellule germinali e nei mastociti. La segnalazione SCF–KIT attiva a valle le vie PI3K–AKT, RAS–MAPK e JAK–STAT, coordinando il mantenimento delle cellule staminali e l’impegno di linea all’interno di nicchie tissutali specializzate. Un’attività deregolata dell’asse KITLG/KIT è implicata in alterazioni della biologia della pigmentazione, in difetti dello sviluppo correlati all’infertilità e in contesti ematologici e di tumori solidi guidati da KIT, rendendolo un nodo centrale per lo studio della segnalazione dipendente dai fattori di crescita e del controllo microambientale del destino cellulare.
SCF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KITLG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KITLG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KITLG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KITLG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.