Neutrophil Elastase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400677

Descripción general

ELANE codifica la elastasa de neutrófilos, una proteasa de serina asociada a gránulos que se libera durante la desgranulación del neutrófilo y la formación de NET para escindir proteínas de la matriz extracelular e inactivar factores de virulencia microbianos. Su actividad se integra con la señalización inmunitaria innata, el equilibrio proteasa–antiproteasa y las cascadas inflamatorias que modelan el reclutamiento de leucocitos y la remodelación tisular. La desregulación de la elastasa de neutrófilos contribuye a una proteólisis aberrante y al estrés oxidativo/inflamatorio en microambientes de las vías respiratorias y vasculares, y las variantes de ELANE se asocian a fenotipos de neutropenia congénita con maduración mieloide alterada. En consecuencia, ELANE se estudia ampliamente en biología de los neutrófilos, interacciones huésped–patógeno y mecanismos que acoplan la granulopoyesis al daño tisular inflamatorio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Neutrophil Elastase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELANE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELANE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELANE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Neutrophil Elastase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELANE para la investigación de la señalización de Neutrophil Elastase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELANE críticos para la función de Neutrophil Elastase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELANE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Neutrophil Elastase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELANE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Neutrophil Elastase (h) y el plásmido HDR Neutrophil Elastase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELANE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELANE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.