Giantin Double Nickaseプラスミド (h): sc-418145-NIC

GOLGB1 は Giantin をコードしており、Giantin はゴルジ膜に結合して局在する大型のコイルドコイル型ゴルジンで、輸送小胞を捕捉し、テザリング（係留）過程を調整することでゴルジ体の構造形成を助けます。Giantin は ER からゴルジ体への輸送およびゴルジ内輸送を支え、糖鎖修飾と分泌経路の恒常性維持に寄与し、タンパク質プロセシングに必要なゴルジ酵素の空間配置にも影響します。Giantin 依存的なゴルジ体維持を含むゴルジン機能の破綻は、細胞外マトリックス分泌の変化、分泌経路におけるストレス応答、ならびに繊毛形成や組織形態形成に関連する表現型と結び付けられています。構造および輸送の制御因子として、Giantin はヒト細胞におけるゴルジ体の完全性、小胞ダイナミクス、タンパク質成熟を研究する細胞生物学の分野で広く利用されています。

Giantin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GOLGB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GOLGB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GOLGB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GOLGB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。