G9a Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430994-LAC

Il gene murino **Ehmt2** codifica la metiltransferasi della lisina **G9a (EHMT2)**, uno dei principali “writer” dei marcatori **H3K9me1/2**, che promuovono la formazione di eterocromatina facoltativa e una repressione genica stabile. G9a coordina programmi di silenziamento epigenetico che modellano l’impegno di linea, lo sviluppo embrionale e il mantenimento dell’identità cellulare tramite il crosstalk con la metilazione del DNA e i complessi di rimodellamento della cromatina. Regolando reti trascrizionali legate al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e allo stato metabolico, Ehmt2 influenza diverse vie nucleari che governano la differenziazione e l’adattamento allo stress. L’attività deregolata di G9a e i pattern di metilazione di H3K9 sono frequentemente studiati in contesti di riprogrammazione trascrizionale oncogena, alterazioni dell’espressione genica associate alla fibrosi e fenotipi neuroevolutivi in sistemi modello.

Le particelle di attivazione lentivirale G9a (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ehmt2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale G9a (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ehmt2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di G9a. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ehmt2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.