Dnmt1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420033-ACT

Das Mausgen **Dnmt1** kodiert die DNA-Methyltransferase 1, die wichtigste Erhaltungs-Methyltransferase, welche während der DNA-Replikation CpG-Methylierungsmuster kopiert, um die epigenetische Zellidentität zu bewahren. DNMT1 wirkt innerhalb chromatinregulatorischer Netzwerke zusammen mit UHRF1 und Methyl-CpG-bindenden Proteinen und beeinflusst dabei Transkriptionsrepression, genomisches Imprinting, X-Chromosomen-Inaktivierung sowie die Stilllegung von Transposons. Durch die Kopplung der DNA-Methylierung an Histonmodifikationen und an die replikationsgekoppelte Chromatinassemblierung trägt DNMT1 zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität und koordinierter Genexpressionsprogramme bei. Eine fehlregulierte DNMT1-Aktivität oder -Expression ist mit aberranten Methylierungslandschaften verbunden, die an onkogener Transformation, Entwicklungsdefekten und neurobiologischen Phänotypen beteiligt sind, wodurch DNMT1 einen zentralen Knotenpunkt für Epigenetik- und Krankheitsmodellforschung darstellt.

Dnmt1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Dnmt1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dnmt1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Dnmt1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Dnmt1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dnmt1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Dnmt1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dnmt1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dnmt1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Dnmt1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.