Particules Lentivirales d'Activation (h) CYP7B1: sc-405345-LAC

CYP7B1 code une enzyme microsomale du cytochrome P450 qui catalyse l’hydroxylation en 7α des stérols, contribuant au catabolisme du cholestérol et à la biosynthèse des acides biliaires, tout en modulant le métabolisme des oxystérols et des neurostéroïdes. En façonnant les niveaux d’intermédiaires tels que le 27‑hydroxycholestérol, CYP7B1 influence la signalisation lipidique et des programmes transcriptionnels régulés par des récepteurs nucléaires. Une activité altérée de CYP7B1 a été associée à une perturbation de l’homéostasie des stérols et de voies pertinentes pour la neurobiologie, et des variations génétiques sont liées à des phénotypes neurodégénératifs et neuromusculaires héréditaires. Ces propriétés font de CYP7B1 un nœud utile pour étudier le dialogue métabolique entre le flux des stérols, la signalisation endocrine et la régulation génique spécifique des tissus.

Les particules d'activation lentivirales CYP7B1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CYP7B1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP7B1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CYP7B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP7B1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CYP7B1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.