CMTM4 Plasmide Double Nickase (h): sc-405296-NIC

CMTM4 (proteina 4 contenente un dominio transmembrana MARVEL simile a CKLF) è una proteina di membrana multipasso che si localizza in compartimenti endosomiali e della membrana plasmatica e contribuisce all’organizzazione della membrana e al traffico vescicolare. Tramite il suo dominio MARVEL, CMTM4 è stata associata alla regolazione del turnover e della stabilità dei recettori, inclusa la modulazione della segnalazione dei checkpoint immunitari attraverso effetti sull’espressione di PD-L1 sulla superficie cellulare. Queste attività collocano CMTM4 all’interfaccia tra endocitosi, dinamica di membrana e vie di segnalazione immuno-correlate che influenzano le interazioni cellula–cellula. Un’espressione o una funzione deregolata di CMTM4 è stata studiata nel contesto dell’elusione immunitaria tumorale e di fenotipi immunoregolatori più ampi, rendendola rilevante per studi meccanicistici in modelli di oncologia e immunologia.

CMTM4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CMTM4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CMTM4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CMTM4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CMTM4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.