Plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Maf (m): sc-421531

Présentation

Maf code pour c-Maf, un facteur de transcription à fermeture éclair de leucines (bZIP) qui régule des programmes d’expression génique spécifiques de lignées dans les tissus immunitaires et endocriniens. Chez la souris, c-Maf est un déterminant clé de la différenciation des lymphocytes T et de l’expression des cytokines, contribuant à des réseaux transcriptionnels qui façonnent la polarisation des lymphocytes T auxiliaires et les réponses des macrophages, et il participe également à la régulation de gènes dans le cristallin et les îlots pancréatiques. c-Maf intègre des signaux issus des voies MAPK et de voies activées par les cytokines afin de moduler l’accessibilité de la chromatine ainsi que l’activité des promoteurs et des enhancers sur des loci cibles. Une activité de MAF dérégulée a été associée à une inflammation à médiation immunitaire et à des états transcriptionnels oncogéniques dans les hémopathies malignes, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de voies et les modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Maf (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Maf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Maf, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Maf à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine c-Maf.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Maf pour l'étude de la signalisation de c-Maf, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Maf essentiels à la fonction de c-Maf
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Maf pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le c-Maf plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le c-Maf plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Maf. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le c-Maf plasmide HDR (m) et le c-Maf (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Maf pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Maf définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.