ACTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418966

Übersicht

Actc1 kodiert kardiales Alpha-Aktin (ACTC1), eine zentrale Komponente der dünnen Filamente im Sarkomer, die zu F-Aktin polymerisiert und die Krafterzeugung in quergestreifter Muskulatur unterstützt. ACTC1 wirkt mit Myosin, Tropomyosin und dem Troponin-Komplex zusammen, um die Ca2+-abhängige Kontraktion zu regulieren, und trägt zur Myofibrillenassemblierung, zur Organisation der Sarkomere sowie zur mechanotransduktiven Signalübertragung des Zytoskeletts bei. In der Maus ist Actc1 von hoher Bedeutung für die Entwicklung und das Remodeling von Herz- und Skelettmuskel und verknüpft die Dynamik der Aktinfilamente mit Signalwegen, die Kontraktilität, Zellstruktur und Stressantworten steuern. Genetische und funktionelle Störungen von ACTC1 sind mit kardiomyopathiebezogenen Phänotypen und abnormaler Muskelfunktion assoziiert, was es zu einem nützlichen Ansatzpunkt macht, um krankheitsrelevante Veränderungen der Sarkomerintegrität und der Herzphysiologie zu untersuchen.

Das ACTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Actc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Actc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Actc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Actc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Actc1-Exone abzielen, die für die ACTC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Actc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Actc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTC1 HDR-Plasmid (m) und ACTC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Actc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Actc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.