ACTA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400005-ACT

O ACTA1 codifica a α-actina do músculo esquelético, um componente central dos filamentos finos que se polimeriza em F-actina para sustentar a montagem do sarcómero, a geração de força e a organização do citoesqueleto no músculo estriado. Por meio de interações com miosina, tropomiosina e o complexo da troponina, o ACTA1 integra-se na contratilidade actomiosínica e em processos de mecanotransdução que moldam a estrutura e a função das fibras musculares. A dinâmica da actina dependente de ACTA1 também influencia a arquitetura celular e vias de sinalização ligadas à diferenciação e à manutenção muscular. A desregulação ou variação patogénica em ACTA1 está associada a miopatias esqueléticas hereditárias caracterizadas por organização deficiente dos filamentos e desempenho contrátil alterado.

ACTA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACTA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACTA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACTA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACTA1 em células tumorais com expressão de ACTA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.