A20/TNFAIP3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400447-LAC

TNFAIP3 kodiert A20, ein Zinkfinger-Ubiquitin-editierendes Enzym, das als zentraler negativer Regulator inflammatorischer Signalübertragung fungiert. A20 beendet die NF-κB-Aktivierung nachgeschaltet von TNF-Rezeptor-, Toll-like-Rezeptor- und IL‑1-Rezeptor-Signalwegen, indem es K63- und M1-verknüpfte Ubiquitinketten moduliert und den proteasomalen Abbau wichtiger Adapterproteine fördert. Dadurch begrenzt A20 die Zytokinproduktion, Überlebenssignale der Zelle und die Aktivierung der angeborenen Immunantwort und trägt so zur Aufrechterhaltung der Gewebehomöostase bei. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von TNFAIP3 ist mit aberranten Immunantworten assoziiert und wurde mit Mechanismen autoimmuner und entzündlicher Erkrankungen sowie mit Signalabhängigkeiten in bestimmten Malignomen in Verbindung gebracht.

A20/TNFAIP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TNFAIP3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

A20/TNFAIP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TNFAIP3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen A20/TNFAIP3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TNFAIP3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.