ZIP10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406811

Panoramica

SLC39A10 codifica ZIP10, un trasportatore di ingresso dello zinco nella membrana plasmatica appartenente alla famiglia SLC39/ZIP, che regola la disponibilità citosolica di Zn2+ per l’attività dei metalloenzimi, dei fattori di trascrizione a dita di zinco e della segnalazione sensibile allo stato redox. Controllando l’omeostasi dello zinco, ZIP10 influenza vie collegate alla proliferazione cellulare, alla differenziazione e alle risposte allo stress, incluse cascate di segnalazione modellate dalla modulazione, dipendente dallo zinco, dell’attività di chinasi e fosfatasi. Un’alterata espressione di ZIP10 o una gestione anomala dello zinco sono state associate in letteratura alla funzione delle cellule immunitarie, alla biologia epiteliale e a fenotipi correlati ai tumori, a riflesso dell’ampia dipendenza dei programmi cellulari dalla disponibilità di zinco. Queste caratteristiche rendono SLC39A10 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione regolate dallo zinco e della biologia del trasporto di ioni metallici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZIP10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC39A10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC39A10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC39A10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZIP10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC39A10 per lo studio della segnalazione di ZIP10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC39A10 critici per la funzione di ZIP10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC39A10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZIP10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZIP10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC39A10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZIP10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZIP10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC39A10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC39A10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.