Wee 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423702

Descripción general

Wee1 de ratón codifica la quinasa proteica WEE1, un regulador central del punto de control G2/M que restringe la actividad de CDK1 mediante fosforilación inhibitoria para prevenir la entrada prematura en mitosis. Al integrar señales de las vías de daño en el ADN y estrés replicativo mediadas por ATR/CHK1, WEE1 ayuda a coordinar la integridad del genoma con la progresión del ciclo celular. La alteración de Wee1 puede modificar el control del punto de control, la tolerancia al estrés replicativo y la fidelidad mitótica, procesos que con frecuencia se implican en la biología tumoral y otros trastornos proliferativos. Por ello, Wee1 se estudia ampliamente en los mecanismos de regulación del ciclo celular, las respuestas al daño en el ADN y las interacciones de letalidad sintética con otros factores de control y reparación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wee 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wee1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wee1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wee1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wee 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wee1 para la investigación de la señalización de Wee 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Wee1 críticos para la función de Wee 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wee1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Wee 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Wee 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wee1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wee 1 (m) y el plásmido HDR Wee 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wee1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wee1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.