VPS54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-434184

概要

Vps54 は、エンドソームからトランスゴルジネットワーク（TGN）への逆行性輸送を促進し、適切なゴルジ体の構造維持を支える係留複合体 GARP（Golgi-associated retrograde protein）の中核サブユニットである VPS54 をコードします。小胞の捕捉と融合を協調させることで、VPS54 は膜タンパク質のリサイクリング、糖鎖修飾に依存したカーゴの選別、そして分泌経路全体の恒常性の維持に寄与します。GARP 構成因子が障害されると、エンドリソソーム輸送が乱れ、細胞ストレス応答が誘導され、輸送不全やオルガネラの完全性低下を介して神経細胞の維持に関わる経路が変化し得ます。膜輸送はプロテオスタシスやシグナル伝達と密接に結び付いているため、Vps54 は神経発生や神経変性に関連する機構の研究でしばしば解析対象となります。

VPS54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVps54遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vps54内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vps54のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPS54タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPS54シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vps54欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPS54の機能に不可欠なVps54エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vps54ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPS54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVPS54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vps54遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPS54 HDRプラスミド（m）および VPS54 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVps54ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVps54標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。