VPS33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433270

概要

Vps33b は、エンドソーム―リソソーム輸送を制御する係留および膜融合装置の中核構成要素として機能する Sec1/Munc18 ファミリータンパク質 VPS33B をコードする。VPS33B は、VPS16/18/33/41（HOPS/CORVET 関連）ネットワークおよび VPS33B–VIPAR 複合体と協調して、小胞のドッキング、膜融合、ならびに上皮細胞の極性維持を支える。マウス細胞では、VPS33B 活性はカーゴのソーティング、リソソーム関連オルガネラの生合成、調節性分泌に寄与し、膜恒常性と細胞内輸送を制御するより広範な経路と結び付いている。VPS33B 依存的な輸送の破綻は、極性輸送や血小板顆粒形成の異常と関連付けられており、上皮系および造血系の機能不全を伴う病態を研究するための機序的枠組みを提供する。

VPS33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVps33b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vps33b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vps33bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPS33Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPS33Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vps33b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPS33Bの機能に不可欠なVps33bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vps33bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPS33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVPS33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vps33b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPS33B HDRプラスミド（m）および VPS33B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVps33bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVps33b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。