Vigilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431035

概要

マウスの Hdlbp は、複数の KH ドメインをもつ大型の RNA 結合タンパク質であるビジリン（vigilin）をコードしており、mRNA やリボヌクレオタンパク質複合体に会合して、転写産物の安定性、局在、翻訳に影響を与えます。ビジリンは特定の mRNA との相互作用を介して脂質およびステロール代謝関連遺伝子の発現制御に関与することが示されており、細胞のエネルギーバランスや膜恒常性を制御するより広範な経路との関連が示唆されています。また、増殖やストレス応答における転写後の遺伝子制御にも関与し、RNA プロセシングおよび翻訳制御における役割と整合的です。ビジリンに関連する RNA ネットワークの破綻は、代謝表現型や疾患機序に関係する遺伝子発現プログラムの変化を伴う文脈で検討されています。

Vigilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHdlbp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hdlbp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hdlbpのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Vigilinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Vigilinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hdlbp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Vigilinの機能に不可欠なHdlbpエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hdlbpゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Vigilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVigilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hdlbp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Vigilin HDRプラスミド（m）および Vigilin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHdlbpホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHdlbp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。