Plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX2 (h): sc-407255

Présentation

VAX2 (ventral anterior homeobox 2) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule des programmes d’expression génique nécessaires à la mise en place des patrons embryonnaires de la rétine ventrale et de la tige optique. Il agit au sein de réseaux transcriptionnels du développement qui s’articulent avec la signalisation par des morphogènes, notamment les gradients de Sonic hedgehog (SHH) et de l’acide rétinoïque, afin d’établir l’identité dorso-ventrale et d’orienter les décisions de destinée du neuroépithélium. En contrôlant une transcription spatialement restreinte dans l’œil en développement, VAX2 contribue à coordonner la différenciation des cellules rétiniennes, le guidage axonal et la formation du nerf optique. Une expression dérégulée de VAX2 ou des altérations des circuits de régulation ont été associées à des malformations oculaires congénitales et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude du développement de l’œil humain et des voies de différenciation impliquées dans la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VAX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VAX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VAX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VAX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VAX2 pour l'étude de la signalisation de VAX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VAX2 essentiels à la fonction de VAX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VAX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VAX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VAX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VAX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VAX2 plasmide HDR (h) et le VAX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VAX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VAX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.