UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423622

概要

Upk3a は、尿路上皮の頂端膜を構成するウロプラキンIIIa（UPIIIa）をコードしており、UPIIIa はテトラスパニン様の分子として、ウロプラキンプラークの組み立てと尿路の透過性バリア維持に関与します。UPIIIa は他のウロプラキンと複合体を形成し、傘細胞（アンブレラ細胞）の終末分化を支えるとともに、膀胱の充満および排尿に伴う膜輸送や機械的安定性を調節します。ウロプラキン組成が乱れると、上皮の完全性が損なわれ、尿路上皮の分化プログラムが変化し、尿路機能障害に関連する炎症反応が促進される可能性があります。マウスモデルでは、Upk3a は上皮バリア形成、尿路上皮のリモデリング、ならびに膀胱表面での宿主—病原体相互作用を制御する経路を解析するために用いられます。

UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUpk3a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Upk3a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Upk3aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UPIIIaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UPIIIaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Upk3a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UPIIIaの機能に不可欠なUpk3aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Upk3aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Upk3a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UPIIIa HDRプラスミド（m）および UPIIIa HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUpk3aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUpk3a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。