UPIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423620

概要

Upk1b はウロプラキンIb（UPIb）をコードしており、UPIb はテトラスパニン様の膜タンパク質として他のウロプラキンと会合し、分化した尿路上皮の傘細胞に存在する非対称単位膜（AUM）プラークを形成します。これらのプラークは、頂端膜の構造維持、バリア機能の完全性、ならびに伸展や排尿に伴う膀胱表面のリモデリングを制御する小胞輸送過程を支えています。UPIb は上皮分化プログラムや膜マイクロドメインの構築にも関与し、細胞骨格の構造を接着装置や表面タンパク質の安定性と結び付けます。ウロプラキンの発現パターンの変化は尿路上皮の状態を示す指標として広く用いられており、バリア機能障害、炎症、尿路上皮の形質転換に関する研究において重要です。

UPIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUpk1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Upk1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Upk1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UPIbタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UPIbシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Upk1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UPIbの機能に不可欠なUpk1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Upk1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UPIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUPIb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Upk1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UPIb HDRプラスミド（m）および UPIb HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUpk1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUpk1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。