TTC7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412780

概要

TTC7Aは、上皮の極性維持や細胞骨格の恒常性を支える多タンパク質複合体の構築に関与すると考えられる、テトラトリコペプチドリピート（TPR）含有タンパク質をコードします。TTC7Aは、ホスホイノシチド関連シグナル伝達や膜輸送プロセスと関連づけられており、これらは細胞接着、アクチンダイナミクス、腸管上皮の健全性に影響します。機能喪失変異は、重篤な早期発症の腸管および免疫系の表現型と関連して報告されているため、TTC7Aは上皮バリア機能障害や免疫調節異常の機序を解明するための有用な切り口となります。ヒト細胞モデルでは、TTC7Aを撹乱することで、膜構造の組織化、ストレス応答、系譜特異的な分化プログラム間の経路クロストークを検討することができます。

TTC7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTTC7A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TTC7A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TTC7Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TTC7Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TTC7Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TTC7A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TTC7Aの機能に不可欠なTTC7Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TTC7Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TTC7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTTC7A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TTC7A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TTC7A HDRプラスミド（h）および TTC7A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTTC7Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTTC7A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。