TSSC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423530

概要

Phlda2 は、pleckstrin homology-like domain family A member 2 タンパク質（TSSC3 とも呼ばれる）をコードする遺伝子であり、刷り込み（インプリンティング）を受ける成長制御因子として、マウスにおける胎盤の発生および胎児成長の制御に関与するとされています。TSSC3 は、ホスホイノシチド依存性のシグナルやストレス応答性の遺伝子発現制御を統合する経路など、細胞増殖および生存に影響するシグナル伝達過程と関連づけられています。Phlda2 遺伝子座における遺伝子量（dosage）の変化や刷り込みの破綻（調節異常）は、発生表現型と関連して報告されており、増殖制御や、特定の細胞状況における腫瘍抑制因子様機能の研究においても重要性があります。母性発現遺伝子としての Phlda2 は、親由来効果、エピジェネティック制御、ならびに用量感受性の転写ネットワークを検討するための有用なモデルでもあります。

TSSC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPhlda2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Phlda2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Phlda2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSSC3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSSC3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Phlda2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSSC3の機能に不可欠なPhlda2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Phlda2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSSC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSSC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Phlda2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSSC3 HDRプラスミド（m）および TSSC3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPhlda2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPhlda2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。