Trypsin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423519

Visão geral

Prss2 codifica a tripsina-2, uma protease serina secretada, produzida como zimogénio e ativada em cascatas proteolíticas que regulam a digestão e o processamento de proteínas extracelulares no pâncreas do rato. Para além da proteólise de nutrientes, a tripsina-2 pode influenciar a remodelação tecidular e a sinalização inflamatória ao ativar outras proteases e ao modular vias de recetores ativados por proteases, com efeitos a jusante na integridade epitelial e nas respostas imunitárias inatas. A atividade desregulada da tripsina está associada a stress das células acinares pancreáticas, ativação aberrante de proteases e lesão inflamatória, tornando o Prss2 um ponto relevante para estudar a fisiologia do pâncreas exócrino e a patologia impulsionada por proteases. Modelos murinos de Prss2 sustentam estudos mecanísticos sobre proteostase, carga da via secretora e interações em redes de proteases em contextos pancreáticos e gastrointestinais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Trypsin-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prss2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prss2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prss2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Trypsin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prss2 para a investigação da sinalização de Trypsin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prss2 críticos para a função Trypsin-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prss2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Trypsin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Trypsin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prss2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Trypsin-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Trypsin-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prss2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prss2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.