TRIP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423507

Panoramica

Trip6 codifica TRIP6, una proteina adattatrice contenente domini LIM che si localizza nelle adesioni focali e nel citoscheletro di actina per coordinare la segnalazione delle integrine, il rimodellamento del citoscheletro e le risposte trascrizionali. TRIP6 funge da impalcatura (scaffold) per chinasi e complessi di segnalazione, collegando le vie delle GTPasi della famiglia Rho e il turnover delle adesioni focali alla regolazione dell’adesione cellulare, dell’espansione (spreading) e della migrazione. Attraverso interazioni con partner citoscheletrici e nucleari, contribuisce alla meccanotrasduzione e alla modulazione di programmi di espressione genica che plasmano le risposte cellulari agli stimoli della matrice extracellulare. La disregolazione delle reti di adesione e motilità associate a TRIP6 è rilevante per lo studio di fenotipi invasivi e dei processi di rimodellamento tissutale in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trip6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trip6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trip6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRIP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trip6 per lo studio della segnalazione di TRIP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trip6 critici per la funzione di TRIP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trip6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRIP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRIP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trip6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRIP6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRIP6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trip6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trip6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.