TPMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423483

概要

Tpmt は、細胞質に存在する S-アデノシル-L-メチオニン依存性メチルトランスフェラーゼであるチオプリン S-メチルトランスフェラーゼ（TPMT）をコードしており、チオプリンおよび関連する含硫基質の S-メチル化を触媒する。マウス細胞では、TPMT 活性は異物およびヌクレオチド類似体の代謝に寄与し、細胞内チオグアニンヌクレオチドのプールを規定するとともに、DNA 複製ストレスや損傷シグナル伝達に対する下流の影響を形成する。TPMT 機能の変動は、臨床応用を示唆することなく、チオプリン感受性の規定因子や造血毒性機序を検討するためのモデルとして広く用いられている。したがって Tpmt は、増殖性組織における薬物の生体内変換、レドックスバランス、ゲノム完全性を結び付ける経路に関連する。

TPMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpmt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpmt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpmtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TPMTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TPMTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpmt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TPMTの機能に不可欠なTpmtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpmtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TPMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTPMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpmt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TPMT HDRプラスミド（m）および TPMT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpmtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpmt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。