Plasmide CRISPR/Cas9 KO TOPORS (h): sc-406762

Présentation

TOPORS (protéine se liant à la topoisomérase I, riche en arginine/sérine) code une protéine nucléaire qui agit comme ligase E3 de l’ubiquitine de type RING et comme ligase E3 de SUMO1, intégrant l’ubiquitination et la sumoylation pour contrôler la stabilité des protéines et la signalisation. Elle se localise dans les corps nucléaires de la leucémie promyélocytaire (PML) et contribue à l’intégrité du génome via la régulation de la réponse aux dommages de l’ADN et de processus associés à la transcription. TOPORS a été impliquée dans le contrôle de la signalisation de p53 et de la protéostasie, ce qui la relie aux réponses au stress cellulaire et à la régulation du cycle cellulaire. Des variations génétiques et une expression altérée de TOPORS ont été associées à des phénotypes de dégénérescence rétinienne et, plus largement, à une susceptibilité accrue à une dérégulation de la signalisation nucléaire dans des contextes pathologiques pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TOPORS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TOPORS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TOPORS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TOPORS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TOPORS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TOPORS pour l'étude de la signalisation de TOPORS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TOPORS essentiels à la fonction de TOPORS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TOPORS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TOPORS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TOPORS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TOPORS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TOPORS plasmide HDR (h) et le TOPORS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TOPORS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TOPORS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.