TNFβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421477
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TNFβ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TNFβ, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TNFβ Anticorpo (E-6): sc-28345
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TNFβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421477 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Lta codifica o fator de necrose tumoral beta (TNFβ, também conhecido como linfotoxina-α), uma citocina da superfamília do TNF produzida principalmente por linfócitos ativados, que sinaliza por meio de TNFR1/TNFR2 e contribui para a organogênese de órgãos linfoides e para a comunicação inflamatória entre células. O TNFβ ativa as vias canônicas de sinalização de NF-κB e MAPK para regular a sobrevivência de leucócitos, redes de citocinas e a expressão de moléculas de adesão, moldando o tráfego de células imunes e o remodelamento tecidual. Em sistemas murinos, a função de Lta está intimamente ligada à organização de estruturas linfoides secundárias e à coordenação de respostas imunes adaptativas. A desregulação da sinalização de TNFβ é frequentemente investigada em modelos de inflamação crônica, autoimunidade e microambientes imunes associados a tumores, nos quais as interações entre estroma e sistema imune estão alteradas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TNFβ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lta em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lta, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lta na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TNFβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lta para a investigação da sinalização de TNFβ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lta críticos para a função TNFβ
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lta para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TNFβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TNFβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lta. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TNFβ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TNFβ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lta para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lta definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.