TIF1γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403230
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIF1γ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TIF1γ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TIF1γ Antibody (XX-19): sc-101179
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIF1γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403230 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TRIM33 codifica TIF1γ, un regolatore trascrizionale della famiglia dei motivi tripartiti (TRIM) e ligasi E3 dell’ubiquitina, che integra il controllo genico dipendente dalla cromatina con la trasduzione del segnale. TIF1γ modula la segnalazione TGF-β/SMAD regolando la disponibilità di SMAD4 e influenza programmi trascrizionali specifici di linea cellulare tramite interazioni con corepressori e macchinari epigenetici. Contribuisce inoltre alla stabilità del genoma e alle risposte al danno del DNA, collegando il controllo trascrizionale alle vie cellulari di risposta allo stress. Un’attività deregolata di TRIM33 è stata associata ad alterazioni della differenziazione e a contesti di segnalazione oncogenica, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e nella regolazione dello sviluppo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIF1γ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIM33 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIM33 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIM33 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIF1γ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIM33 per lo studio della segnalazione di TIF1γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TRIM33 critici per la funzione di TIF1γ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIM33 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TIF1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIF1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIM33. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TIF1γ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIF1γ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIM33 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIM33 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.