TETRAN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411436

Panoramica

MFSD10 codifica TETRAN, una proteina di membrana multipasso che si ritiene partecipi a processi legati al trasporto di soluti e all’omeostasi della membrana, in linea con l’appartenenza alla superfamiglia dei major facilitator. In quanto presunto fattore di tipo trasportatore, TETRAN è di interesse per studi sul traffico endomembranoso, sulla funzione degli organelli e sull’adattamento metabolico cellulare, ambiti in cui variazioni del flusso di piccole molecole possono modulare la segnalazione da stress e i conseguenti programmi trascrizionali. Un’espressione alterata di MFSD10 è stata riportata in dataset trascrittomici in molteplici contesti patologici, a supporto dell’indagine sul suo contributo a metabolismo deregolato e transizioni dello stato cellulare. Definire la funzione di TETRAN può aiutare a chiarire come le reti di trasporto di membrana influenzino i fenotipi di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TETRAN (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MFSD10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MFSD10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MFSD10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TETRAN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MFSD10 per lo studio della segnalazione di TETRAN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MFSD10 critici per la funzione di TETRAN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MFSD10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TETRAN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TETRAN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MFSD10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TETRAN Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TETRAN (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MFSD10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MFSD10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.