TCTE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423316

概要

Tcte2 は、マウス細胞における運動性軸糸（axoneme）の形成および機能に関与するとされる、線毛・鞭毛関連タンパク質 TCTE2 をコードします。TCTE2 は、ダイニン駆動の微小管スライディングと協調した線毛運動を支えることで、精子細胞（精子細胞系列）の成熟や精子運動性などの過程に寄与し、生殖生物学および線毛形成（ciliogenesis）と関連づけられます。運動性線毛の構成要素の破綻は一般に、粘液線毛クリアランス、脳脊髄液の流れ、左右軸（left–right）パターニングに影響し得るため、TCTE2 は線毛病（ciliopathy）の機構研究においても重要です。したがって TCTE2 は、軸糸の組織化、鞭毛内輸送（IFT）に関連する恒常性、ならびに運動性低下による細胞種特異的な影響を調べる上で有用です。

TCTE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTcte2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tcte2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tcte2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TCTE2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TCTE2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tcte2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TCTE2の機能に不可欠なTcte2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tcte2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TCTE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTCTE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tcte2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TCTE2 HDRプラスミド（m）および TCTE2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTcte2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTcte2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。