Plasmide CRISPR/Cas9 KO SZT2 (h): sc-411718

Présentation

SZT2 (seizure threshold 2) code une grande protéine cytosolique qui agit comme régulateur négatif de la signalisation mTORC1 via le complexe KICSTOR, reliant la disponibilité des nutriments et des acides aminés au contrôle lysosomal de l’activité de mTORC1. En limitant l’activation de mTORC1, SZT2 contribue au maintien de l’homéostasie cellulaire dans des processus tels que l’autophagie, le métabolisme et les voies de signalisation de la croissance. La perturbation de SZT2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des encéphalopathies épileptiques, ce qui concorde avec une altération de la détection des nutriments et une dérégulation de la voie mTOR dans les neurones. En conséquence, SZT2 est fréquemment étudié dans des modèles d’excitabilité neuronale, de signalisation associée aux lysosomes et de réponses au stress dépendantes de mTORC1.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SZT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SZT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SZT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SZT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SZT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SZT2 pour l'étude de la signalisation de SZT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SZT2 essentiels à la fonction de SZT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SZT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SZT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SZT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SZT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SZT2 plasmide HDR (h) et le SZT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SZT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SZT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.