Sva Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423225

Descripción general

Sva (asociado al factor esteroidogénico 1) es una proteína nuclear implicada en la regulación de la expresión de genes esteroidogénicos mediante interacciones con programas de transcripción que gobiernan el desarrollo endocrino y la biosíntesis hormonal. En células de ratón, Sva se relaciona con la modulación de la transcripción dependiente de receptores nucleares, influyendo en vías que integran el contexto de la cromatina con la regulación génica específica de tejido. La alteración del control de las redes transcripcionales esteroidogénicas puede afectar la diferenciación gonadal y suprarrenal y, aguas abajo, la homeostasis endocrina, lo que convierte a Sva en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de fenotipos del desarrollo y metabólicos. La investigación de Sva mediante aproximaciones de pérdida o ganancia de función permite diseccionar la circuitería transcripcional que acopla los estados de diferenciación celular con la señalización sensible a hormonas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sva (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sva en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sva junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sva tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sva.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sva para la investigación de la señalización de Sva, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sva críticos para la función de Sva
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sva para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sva CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sva CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sva. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sva (m) y el plásmido HDR Sva (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sva para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sva definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.