STAMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404726

概要

STAMBPは、エンドサイトーシスされたカーゴ上のユビキチン鎖を編集するJAMMファミリーの脱ユビキチン化酵素（AMSH）をコードしており、STAMやHGSなどのESCRT-0構成因子に結合します。ユビキチン依存的なソーティングを制御することで、STAMBPは受容体のダウンレギュレーション、エンドソーム輸送、リソソーム分解を調節し、EGFRをはじめとする増殖因子受容体経路などのシグナル出力に影響を与えます。STAMBPの活性は、ユビキチン鎖トポロジーの調節や初期エンドソームにおけるカーゴ運命決定を通じて、プロテオスタシスおよび細胞ストレス応答にも寄与します。STAMBPの機能破綻は神経発達に関わる表現型や免疫調節異常と関連づけられており、ヒト細胞におけるエンドソーム—リソソーム経路の異常やユビキチンシグナル伝達を研究するうえで有用な標的です。

STAMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSTAMBP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、STAMBP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、STAMBPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、STAMBPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、STAMBPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、STAMBP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• STAMBPの機能に不可欠なSTAMBPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、STAMBPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• STAMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSTAMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、STAMBP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  STAMBP HDRプラスミド（h）および STAMBP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSTAMBPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSTAMBP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。