SPRED1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402981

概要

SPRED1（sprouty-related EVH1 domain-containing protein 1）は受容体型チロシンキナーゼシグナル伝達の負の制御因子であり、ニューロファイブロミン（NF1）のRas-GAP複合体と結合することで、Ras–RAF–MEK–ERK/MAPKカスケードを抑制します。増殖因子依存的なERK活性化を制限することにより、SPRED1は多様な組織環境において細胞の増殖、分化、移動に影響を及ぼします。SPRED1の機能喪失バリアントはレギウス症候群や色素異常、神経発達に関わる特徴と関連しており、SPRED1活性の低下は、がんに関連するシグナル伝達ネットワークにおけるMAPK経路のシグナル強度にも影響し得ます。そのためSPRED1は、ラソパチー（Rasopathy）の生物学モデル、ERK駆動性の転写プログラム、ならびに増殖シグナルのフィードバック制御の研究で広く用いられています。

SPRED1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPRED1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPRED1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPRED1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPRED1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPRED1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPRED1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPRED1の機能に不可欠なSPRED1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPRED1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPRED1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPRED1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPRED1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPRED1 HDRプラスミド（h）および SPRED1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPRED1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPRED1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。