SPA-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406755

Panoramica

SIPA1 codifica SPA-1, una proteina attivatrice della GTPasi (GAP) per Rap1 che accelera l’idrolisi del GTP per limitare la segnalazione di Rap1 e modulare l’adesione mediata dalle integrine, la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare. Regolando la segnalazione inside-out dipendente da Rap1, SPA-1 influenza il traffico delle cellule immunitarie, la stabilità delle giunzioni cellula–cellula e le risposte ai segnali extracellulari. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di SIPA1 sono state associate a una deregolazione dei programmi di proliferazione e motilità rilevanti per la progressione tumorale e il potenziale metastatico. Questa biologia rende SIPA1 un nodo utile per studiare le reti delle piccole GTPasi, la segnalazione dipendente dall’adesione e i comportamenti cellulari guidati dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPA-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIPA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIPA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIPA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPA-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIPA1 per lo studio della segnalazione di SPA-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SIPA1 critici per la funzione di SPA-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIPA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIPA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPA-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPA-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIPA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIPA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.