SOAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423068

概要

マウスのSoat1は、ステロールO-アシルトランスフェラーゼ1（SOAT1）をコードしており、これは小胞体膜に局在する酵素で、長鎖脂肪酸アシルCoAを基質として遊離コレステロールをコレステリルエステルへとエステル化します。この反応は、コレステロール恒常性、脂質滴（リピッドドロップレット）の形成、膜脂質リモデリングを支え、SOAT1を細胞内脂質貯蔵および小胞体ストレス応答と結び付けます。SOAT1活性はコレステロール輸送やリポタンパク質代謝の経路とも交差し、泡沫細胞形成やマクロファージの脂質処理に影響を与え得ます。SOAT1依存的なコレステリルエステル蓄積の異常は、代謝性炎症や脂質駆動性の病態と関連付けられており、Soat1は動脈硬化関連や代謝疾患モデルにおける機序研究の有用な標的となります。

SOAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSoat1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Soat1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Soat1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SOAT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SOAT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Soat1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SOAT1の機能に不可欠なSoat1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Soat1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SOAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSOAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Soat1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SOAT1 HDRプラスミド（m）および SOAT1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSoat1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSoat1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。