SMP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401934

概要

ヒトRGNは、老化マーカープロテイン30（SMP30／レグカルシン）をコードしており、細胞内カルシウム恒常性、酸化還元バランス、代謝制御に関与するとされるカルシウム結合タンパク質です。SMP30は、細胞内のCa2+依存性シグナル伝達の調節、ミトコンドリア機能、酸化ストレス応答に関連づけられており、これらは細胞生存や加齢関連表現型に影響するプロセスです。RGN／SMP30の発現変化は、肝代謝、炎症性ストレス、腫瘍生物学に関わるさまざまな状況で報告されており、カルシウムシグナルと細胞ストレス適応を結びつける経路の解明に有用です。ヒト細胞モデルにおいてRGNの欠失や発現異常を研究することで、細胞老化、解毒能、代謝リプログラミングの機構理解に資する知見が得られます。

SMP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRGN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RGN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RGNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SMP30タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SMP30シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RGN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SMP30の機能に不可欠なRGNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RGNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SMP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSMP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RGN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SMP30 HDRプラスミド（h）および SMP30 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRGNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRGN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。