SmcY Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-403217-KO-2

Descripción general

KDM5D codifica la desmetilasa de lisina SmcY, ligada al cromosoma Y, una enzima con dominio JmjC que elimina las marcas H3K4me3/me2 para regular programas transcripcionales y la accesibilidad de la cromatina. Al remodelar la metilación de histonas asociada a promotores, SmcY contribuye al control epigenético de las transiciones de estado celular, la expresión génica restringida por linaje y la coordinación de procesos dependientes del ADN, como la replicación y la reparación. La variación o desregulación de la actividad de la familia KDM5 se ha asociado con fenotipos de diferenciación y proliferación alterados, y KDM5D se estudia con frecuencia en el contexto de la regulación génica específica del sexo masculino y de las contribuciones ligadas al cromosoma Y a la biología de las enfermedades. Como modificador epigenético, SmcY ofrece un punto de entrada manejable para dilucidar cómo la dinámica de metilación de histonas influye en las salidas de señalización y la regulación del genoma en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SmcY (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KDM5D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KDM5D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KDM5D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SmcY.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KDM5D para la investigación de la señalización de SmcY, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KDM5D críticos para la función de SmcY
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KDM5D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SmcY CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SmcY CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KDM5D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SmcY (h) y el plásmido HDR SmcY (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KDM5D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KDM5D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.