SLC25A3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404129

Panoramica

SLC25A3 codifica il trasportatore mitocondriale del fosfato (PiC), un trasportatore di soluti della membrana interna che importa fosfato inorganico nella matrice per sostenere la fosforilazione ossidativa. Fornendo fosfato all’ATP sintasi e coordinandosi con le traslocasi dei nucleotidi adenilici, SLC25A3 contribuisce a mantenere l’omeostasi energetica cellulare, il potenziale di membrana mitocondriale e l’equilibrio dei metaboliti nei tessuti ad alta richiesta. L’alterazione della funzione di SLC25A3 è stata associata a una compromissione della respirazione mitocondriale e a fenotipi di deficit energetico, con implicazioni per disfunzioni neuromuscolari e cardiometaboliche. La sua attività viene comunemente studiata nel contesto della bioenergetica mitocondriale, del metabolismo del fosfato e delle risposte allo stress che influenzano la gestione delle ROS e la suscettibilità all’apoptosi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC25A3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A3 per lo studio della segnalazione di SLC25A3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC25A3 critici per la funzione di SLC25A3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC25A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLC25A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC25A3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLC25A3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.