SIMP Plasmide Double Nickase (h): sc-404481-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIMP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIMP Double Nickase Plasmid (h) e il SIMP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STT3B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIMP Plasmide Double Nickase (h) | sc-404481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIMP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STT3B codifica una subunità catalitica del complesso oligosaccariltransferasi responsabile della glicosilazione N-linked nel reticolo endoplasmatico, con un ruolo di rilievo nella modifica post-traduzionale delle glicoproteine che sfuggono al trasferimento co-traduzionale dei glicani. Contribuendo al ripiegamento proteico, al controllo qualità e alla degradazione associata al RE (ERAD), STT3B influenza la proteostasi della via secretoria e la maturazione dei recettori di membrana e secreti. Alterazioni della glicosilazione dipendente da STT3B possono modificare il traffico dei recettori e gli output di segnalazione, collegando questa via alle risposte cellulari allo stress e a fenotipi rilevanti per i disturbi dell’omeostasi delle glicoproteine e per la biologia tumorale. In quanto hub della processazione delle glicoproteine nel RE, STT3B è spesso oggetto di studio nelle ricerche sulla regolazione della via secretoria, sulla biogenesi dei recettori immunitari e sul rimodellamento delle reti di proteostasi.
SIMP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STT3B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STT3B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STT3B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STT3B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.