SHBG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402099

Panoramica

La globulina legante gli ormoni sessuali (SHBG) è una glicoproteina plasmatica secreta che lega e trasporta androgeni ed estrogeni, regolando così la frazione libera degli steroidi circolanti e modulando la disponibilità ormonale per i tessuti bersaglio. Agendo da “tampone” nella distribuzione degli steroidi e influenzando la consegna degli ormoni alle cellule, la SHBG contribuisce all’omeostasi endocrina e ai programmi trascrizionali responsivi agli steroidi che modellano la fisiologia metabolica e riproduttiva. Le variazioni nell’espressione o nella funzione della SHBG sono state associate a un’alterata biodisponibilità degli steroidi sessuali e sono spesso studiate in relazione a tratti metabolici e alla biologia di malattie ormone-dipendenti, inclusi il metabolismo glucido-lipidico deregolato e fenotipi endocrini riproduttivi. Modelli in vitro e in vivo di perturbazione della SHBG vengono utilizzati per chiarire i meccanismi che collegano il trasporto degli steroidi alle reti di segnalazione a valle e ai cambiamenti di espressione genica nel fegato e nei tessuti periferici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SHBG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SHBG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SHBG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SHBG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SHBG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SHBG per lo studio della segnalazione di SHBG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SHBG critici per la funzione di SHBG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SHBG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SHBG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SHBG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SHBG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SHBG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SHBG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SHBG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SHBG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.