Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEZ6 (m): sc-422895

Présentation

Sez6 code l’homologue 6 associé aux crises épileptiques (SEZ6), une protéine transmembranaire de type I enrichie dans le système nerveux, qui contribue à la différenciation neuronale, à l’arborisation dendritique et à la formation des synapses. SEZ6 participe à des voies de trafic membranaire et de maturation protéolytique, notamment au clivage de l’ectodomaine (« ectodomain shedding »), susceptible d’influencer la signalisation intercellulaire et les programmes de croissance des neurites. Dans des modèles murins, une expression ou une fonction altérée de Sez6 a été associée à des modifications de la connectivité synaptique et de l’équilibre excitation/inhibition, ce qui appuie sa pertinence pour des phénotypes neurodéveloppementaux et liés aux crises. En tant que régulateur neuronal associé à la surface cellulaire, SEZ6 est fréquemment étudiée dans le contexte de la maturation des circuits et de la plasticité dépendante de l’activité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEZ6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sez6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sez6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sez6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEZ6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sez6 pour l'étude de la signalisation de SEZ6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sez6 essentiels à la fonction de SEZ6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sez6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEZ6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEZ6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sez6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEZ6 plasmide HDR (m) et le SEZ6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sez6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sez6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.