Plasmide CRISPR/Cas9 KO SerpinA6 (h): sc-407031

Présentation

SERPINA6 code la SerpinA6, également appelée globuline liant les corticostéroïdes (CBG), un membre sécrété de la famille des inhibiteurs de protéases à sérine, qui régule principalement la biodisponibilité systémique des glucocorticoïdes en se liant au cortisol et en le transportant dans le plasma. En tamponnant les niveaux de cortisol libre, la SerpinA6 influence la signalisation du récepteur des glucocorticoïdes et les programmes transcriptionnels en aval qui façonnent le métabolisme, les réponses immunitaires et la physiologie du stress. Une expression altérée de SERPINA6 ou des variations génétiques ont été associées à une dérégulation de l’activité de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien et à des phénotypes liés au cortisol, notamment une susceptibilité accrue à des traits métaboliques et inflammatoires. Dans des systèmes expérimentaux, SERPINA6 constitue un levier pour disséquer les interactions croisées de la signalisation endocrine avec les voies sécrétoires hépatiques et l’homéostasie des protéines extracellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SerpinA6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SERPINA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SERPINA6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SERPINA6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SerpinA6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SERPINA6 pour l'étude de la signalisation de SerpinA6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SERPINA6 essentiels à la fonction de SerpinA6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SERPINA6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SerpinA6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SerpinA6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SERPINA6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SerpinA6 plasmide HDR (h) et le SerpinA6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SERPINA6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SERPINA6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.