SEMA6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422888

概要

Sema6bは、膜貫通型のガイダンス因子であるセマフォリン6B（SEMA6B）をコードし、プレキシン（Plexin）ファミリー受容体を介してシグナルを伝達することで、細胞間コミュニケーション、細胞骨格の再編成、方向性をもった移動を制御する。神経系では、軸索ガイダンス、神経突起の伸長、シナプス構造の形成に関与し、成長円錐の動態や組織パターニングを形作るRho GTPase依存性およびキナーゼ依存性経路と統合的に機能する。神経発生にとどまらず、セマフォリンシグナルは免疫細胞の配置や血管リモデリングにも影響し、SEMA6B依存的な過程を炎症や血管新生に関連する表現型へと結び付ける。セマフォリン–プレキシンシグナルの異常は、発生異常や、神経疾患やがんに関わる細胞運動プログラムの破綻に関与するとされており、マウスモデルを用いた機序解析研究を行う根拠となっている。

SEMA6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema6b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema6b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema6bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA6Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA6Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema6b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA6Bの機能に不可欠なSema6bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema6bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA6B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema6b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA6B HDRプラスミド（m）および SEMA6B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema6bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema6b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。