Selenoprotein K Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407002

Panoramica

SELENOK codifica la selenoproteina K, una piccola proteina di membrana del reticolo endoplasmatico che incorpora selenocisteina e sostiene l’omeostasi redox nelle cellule immunitarie e secretorie. La selenoproteina K partecipa al controllo di qualità associato al RE ed è collegata al flusso di calcio e alla palmitoilazione delle proteine tramite l’interazione con il complesso della palmitoiltransferasi DHHC6, influenzando la segnalazione recettoriale e l’organizzazione delle membrane. Contribuisce a un’attivazione efficiente delle cellule immunitarie, alle risposte allo stress ossidativo e alla proteostasi in condizioni di stress infiammatorio o metabolico. Un’attività alterata di SELENOK è stata associata a una segnalazione infiammatoria deregolata e a fenotipi rilevanti per la biologia delle malattie immuno-mediate e neurodegenerative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein K (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SELENOK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SELENOK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SELENOK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Selenoprotein K.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SELENOK per lo studio della segnalazione di Selenoprotein K, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SELENOK critici per la funzione di Selenoprotein K
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SELENOK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Selenoprotein K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Selenoprotein K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SELENOK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Selenoprotein K Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Selenoprotein K (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SELENOK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SELENOK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.